Bakhsh, AllahHossaın, Md Jakır2021-12-282021-12-2820212021-06Hossaın, M.J. (2021). Development of insect resistant transplastomic potato lines against colorado potato beetle (Leptinotersa decemlineata). (Doktora Tezi) Niğde Ömer Halisdemir Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Niğdehttps://hdl.handle.net/11480/8620Patates Böceğinden kaynaklanan ürün kaybının azaltılması amacıyla, patates kloroplastı, biyolistik gen tabancası aracılı transformasyon protokolüyle transforme edilmiştir. Bombalanan eksplantlar BAP (2.0 mg L-1), NAA (0.2 mg L-1), TDZ (2.0 mg L-1), GA3 (0,1 mg L-1) ve ayrıca seleksiyon için spektinomisin 50 mg L-1 içeren MS ortamında büyütülmüştür. Santae çeşidi en yüksek oranda (%85.7) transplastomik sürgün üretirken, Kuroda çeşidinin yaprak eksplantları en yüksek sayıda (%92) kallus indüklemiştir. Sürgün rejenerasyonu için Thiadiazuron daha yeterli (%41) bulunmuştur. Santae ve Challenger çeşitlerinin sürgün rejenerasyon etkililiğini (%9.6) Simply Red (%8.8) takip etmiştir. PCR amplifikasyonu 21 transplastomik filizin 16sı spektinomisine dayanıklı olarak sonuçlanmıştır. İlgili genlerin entegrasyonu, PCR ve Southern blot ile doğrulanırken, ekspresyon seviyesini kaydetmek için RT-qPCR ve ELISA kullanıldı. Görsel markör geni gfp'nin lokalizasyonu konfokal lazer taramalı mikroskop ile tespit edilmiştir. Transplastomik hatlar CPB'nin larva ve yetişkin aşamasında yüksek böcek ölümünü (%100) sağlamak için yeterli olmuştur. Sa7, SR5 ve Ch3 transplastomik hatları CPB'nin yetişkin ve larva instar aşamasında daha böcek öldürücü etki göstermiştir. İki insektisidal gene sahip transplastomik hatlarımızın, insektisite dirençli CPB'yi kontrol etmek için uygun bir çözüm olarak kalacağına inanıyoruz. Anahtar Kelimeler: CPB, ekonomik zarar, böcek direnci, bacillus thuringiensis, transplastomik yaklaşımAimed to mitigate the CPB mediate crop losses, Potato chloroplast was transformed with biolistic gene gun mediated transformation protocol. Bombarded explants ( Leaves and internode) were cultured on MS medium supplemented with BAP (2.0 mg L?1), NAA (0.2 mg L?1), TDZ (2.0 mg L?1) as well as GA3 (0.1 mg L?1) where spectinomycin 50 mg L-1 was used as a selection agent. Leaf explants of cultivar Kuroda induced highest (92%) number of calli where cultivar Sante produced the highest (85.7%) transplastomic shoots. Thiadiazuron was found more proficient (41%) for shoot regeneration. Cultivar Sante and Challenger showed 9.6% shoot regeneration efficiency (%) followed by cultivar Simply Red (8.8%). PCR amplification yielded 16 transplastomic plantlets out of 21 spectinomycin resistant shoots. Target gene integration was confirmed by PCR and Southern blot, whereas the RT-qPCR and ELISA was used to record the expression level. Localization of visual marker gene gfp was conducted by Laser scanning confocal microscopy. The transplastomic lines were capable to ensure high mortality (100%) to both larvae and adult CPB where transplastomic lines Sa7, SR5 and Ch3 showed more insecticidal effects. Foliage consumption and weight gain of CPB feed on transplastomic leaves were lower compared to their control plants. We believe that our transplastomic lines with two insecticidal genes will remain a viable solution to control the insecticide resistant CPB. Keywords: Insect pests, economic damages, insect resistance, bacillus thuringiensis, transplastomic approacheninfo:eu-repo/semantics/openAccessInsect pestsİnsect resistanceBacillus thuringiensisTransplastomic approachCPBBöcek direnciBacillus thuringiensisTransplastomik yaklaşımDoctoral Thesis683923