Böceklere Geniş Spektrumlu Dayanıklılık Gösteren Patates Bitkilerinin Geliştirilmesi Için Bitki Aracılığıyla Yeni Bir RNAi Stratejisi
No Thumbnail Available
Date
2019
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Access Rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
Abstract
Bacillus thuringiensis? den elde edilen cry genlerinin ifade edilmesiyle elde dilen transgenik bitkilerin yoğun bir şekilde tarımının yapılması, Bt bitkilerine karşı böcek ve zararlı dayanıklılığı ile sonuçlanmıştır. Etkili bir bitki zararlısı mücadelesi için, bu bitkilerin sürdürülebilirliği ve kalıcılığı sorgulanmaktadır. Son zamanlarda, RNA interferaz tekniği bitki böcek ve zararlılarına karşı bitki iyileştirme konusunda önemli bir yöntem olduğunu kanıtlamıştır. Bu proje RNA interferaz tekniğini kullanarak, patates güvesi ve Colorado patates böceğinde bulunan yüksek derecede spesifik deri değiştime ile ilgili Ecdysone Reseptör geninin (EcR) susturulmasına odaklanmştır. Patates böceği ve patates güvesinden elde edilmiş olan EcR geninin kısmi cDNA?sı özel primerler kullanılarak sens ve antisens yönlerinde aralarında bir intron içerecek şekilde pRNAi-GG vektörüne klonlanmıştır. Agria ve Lady Olympia çeşitlerininin yaprak ve internod eksplantları, pRNAi-CPB ve pRNAi-PTM plasmidleri ile EcR bölgelerine sahip LBA4404 Agrobakteri suşu ile, 35S promotör kontöründe sens ve antisens yönlerinde, transforme edilmiştir. Neomycin phosphotransferase (nptII) geni 100 mg L-1 konsantrasyonunda markör olarak kullanılmıştır. Elde edilen birincil transformantlar, standart moleküler analizler ile bitki genomunda T-DNA?ya uygun şekilde entegrasyon göstermiştir. Southern emdirme sonuçları, bitki genomunda genin entegrasyonunu gösterirken, RT-qPZR sonuçları EcR geninin transgenik bitkilerde birikme seviyelerini ortaya koydu. Çeşitlerden geliştirilen bitkiler CPB ve PTM larvalarının birincil, ikincil ve üçüncül evrelerinin etkinlikleri açısından değerlendirildi. Yaprak biyotoksisite analizleri ile iki böcek türünde de % 15-80 ölüm oranı belirlendi. Kontrol bitkilerle kıyaslandığında (1.87-6.53 X), trangenik bitkilerle beslenen böceklerde larva ağırlığında önemli derecede azalış (0.87-4.14 X) gözlendi. Ayrıca, RT-qPZR analizleri EcR geninin ifade seviyesindeki azalmayı ortaya çıkartarak, her iki böcekle muamele edilmiş EcR-dsRNA?nın işlevselliğini gösterdi. Bu çalışma, patates böcek zararlılarınının Ecdysone reseptör protein geninin ekspresyonunun susturulması için hedef zararlılara karşı dsRNA?nın patateste ifade edilmesi sonucunda RNAi teknolojisinin işlevselliğini ve entegre zararlı denetiminde etkili bir araç olduğunu gösteren ilk çalışmadır.
Description
15.04.2019
Keywords
Biyoloji, Bahçe Bitkileri, Biyoteknoloji ve Uygulamalı Mikrobiyoloji, RNAi, Böceğe dirençlilik, Trangenik teknolojisi, Ecdysone reseptörü
