Escherichia coli O157:H7'yi enfekte eden bakteriyofajların izolasyonu, karakterizasyonu ve ıspanak ve hıy0arda biyokoruyucu olarak kullanılma imkânlarının belirlenmesi
Yükleniyor...
Tarih
2021
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Niğde Ömer Halisdemir Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Bu çalışmada E. coli O157:H7'yi enfekte eden 22 tane faj izole edilip saflaştırılmıştır. Fajlardan konak hücre aralığı en geniş olan fajların Eco-OH6, OH5 ve OH8 olduğu ve EOP değerlerinin 0,01-1,0 arasında değiştiği saptanmıştır. Çalışmanın devamında 4 faj seçilip (Eco-OH5, OH6, OH8 ve OH12) ve plak boyutlarının 0,88-1,02 mm arasında olduğu belirlenmiştir. TEM analizi ile Eco-OH6, OH8 ve OH12'nin Myoviridae, Eco-OH5 fajının ise Siphoviridae familyasında olduğu belirlenmiştir. Fajların genomunda stx1 ve stx2 gen bölgelerine rastlanmamıştır. Tek aşamalı gelişim kurvesi ile 15-25 dk arasında latent dönemleri ve 49 ile 208 pob/hücre arasında patlama büyüklükleri olduğu belirlenmiştir. MOI değeri vB_EcoM-OH6 fajı için 1; vB_EcoS-OH5 ve vB_EcoM-OH12 için 0,0001; vB_EcoM-OH8 için ise 0,01 olarak bulunmuştur. Fajların geniş pH (2-12) ve sıcaklık (50°C -90°C) aralığında stabilitelerini korudukları ve inkübasyonun ilk 5 dakikasında konak hücrelerine %99'un üzerinde adsorbe oldukları belirlenmiştir. Fajların sıvı besiyerinde 37, 30 ve 20°C'de ve buzdolabı koşullarında kuvvetli litik aktivite gösterdikleri belirlenmiştir. Hıyar ve ıspanak örneklerinde hem 4°C hem 10°C'de muhafaza süresince E. coli O157:H7 sayısını düşürdükleri belirlenmiştir.
In this study, 22 phages infecting E. coli O157:H7 were isolated and purified. It was determined that the phages with the largest host cell range were Eco-OH6, OH5 and OH8 and their EOP values varied between 0,01-1,0. In the continuation of the study, 4 phages were selected (Eco-OH5, OH6, OH8 and OH12) and plaque sizes were determined to be between 0,88-1,02 mm. By TEM analysis, it was determined that Eco-OH6, OH8 and OH12 were in the Myoviridae family and Eco-OH5 phage was in the Siphoviridae family. The stx1 and stx2 gene regions were not found in the genome of phages. The latent periods were determined between 15-25 min and burst sizes between 49 and 208 pob/cell with one-step growth experiment. MOI value was 1 for vB_EcoM-OH6 phage, 0,0001 for vB_EcoS-OH5 and vB_EcoM-OH12; 0,01 for vB_EcoM-OH8. It was determined that the phages remained stable in a wide range of pH (2-12) and temperature (50°C -90°C) and adsorbed over rate of 99% of the host cells in the first 5 minutes of incubation. It was determined that phages showed strong lytic activity in liquid medium at 37, 30 and 20°C and under refrigerated conditions. It was determined that they decreased the number of E. coli O157:H7 during storage at both 4°C and 10°C in cucumber and spinach samples.
In this study, 22 phages infecting E. coli O157:H7 were isolated and purified. It was determined that the phages with the largest host cell range were Eco-OH6, OH5 and OH8 and their EOP values varied between 0,01-1,0. In the continuation of the study, 4 phages were selected (Eco-OH5, OH6, OH8 and OH12) and plaque sizes were determined to be between 0,88-1,02 mm. By TEM analysis, it was determined that Eco-OH6, OH8 and OH12 were in the Myoviridae family and Eco-OH5 phage was in the Siphoviridae family. The stx1 and stx2 gene regions were not found in the genome of phages. The latent periods were determined between 15-25 min and burst sizes between 49 and 208 pob/cell with one-step growth experiment. MOI value was 1 for vB_EcoM-OH6 phage, 0,0001 for vB_EcoS-OH5 and vB_EcoM-OH12; 0,01 for vB_EcoM-OH8. It was determined that the phages remained stable in a wide range of pH (2-12) and temperature (50°C -90°C) and adsorbed over rate of 99% of the host cells in the first 5 minutes of incubation. It was determined that phages showed strong lytic activity in liquid medium at 37, 30 and 20°C and under refrigerated conditions. It was determined that they decreased the number of E. coli O157:H7 during storage at both 4°C and 10°C in cucumber and spinach samples.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Bakteriyofaj, Biyokoruyucu, Escherichia coli O157:H7, Morfolojik, Latent periyot, Patlama büyüklüğü, Shiga toksin, Stabilite, Litik aktivite, Hıyar, Ispanak, Bacteriophage, Bioprotective, Escherichia coli O157:H7, Morphology, Latent period, Burst size, Shiga toxin, Stability, Lytic activity, Cucumber, Spinach
Kaynak
WoS Q Değeri
Scopus Q Değeri
Cilt
Sayı
Künye
Sakin, Şahin, T. (2021). Escherichia coli O157H7'yi enfekte eden bakteriyofajların izolasyonu, karakterizasyonu ve ıspanak ve hıy0arda biyokoruyucu olarak kullanılma imkânlarının belirlenmesi. (Doktora Tezi) Niğde Ömer Halisdemir Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Niğde
